Информация

22.6: Гидролитические и другие среды - крахмал, обезжиренное молоко, желатин, индол, мочевина, Kligler’s / TSI - биология

22.6: Гидролитические и другие среды - крахмал, обезжиренное молоко, желатин, индол, мочевина, Kligler’s / TSI - биология


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Вступление

Многие бактерии могут производить ферменты, которые выделяют в окружающую среду. В этой серии тестов вы обнаружите производство экзоферментов, наблюдая за гидролизом рассматриваемого питательного вещества или самого продукта гидролиза.

Финальный тест - комбо-пакет. Тест Клиглера или Triple Sugar Iron (два очень похожих теста) может определять использование сахара и образование газа в результате ферментации, а также способность производить сероводород ( ( ce {H2S} )). Производство ( ce {H2S} ) - это уникальная способность некоторых бактерий, которая может быть очень важным фактором.

Индоловый тест - гидролиз триптофана

Цель: Для определения выработки триптофаназы. Часть тестов IMViC.

СМИ: Чашки с триптонным агаром

Реагенты / индикаторы: Индоловые сухие горки.

Механизм / реакции: Триптофаназа вызывает гидролиз триптофана → индола + пировиноградной кислоты.

Направления: Используя стерильную деревянную палочку (не используйте проволоку для посева), выберите небольшое количество бактерий с чашки ТА и коснитесь участка на одной секции сухого предметного стекла. Обратите внимание на изменение цвета на розовый / красный в течение примерно 30 секунд. СУХИЕ СЛАЙДЫ МОГУТ ИСПОЛЬЗОВАТЬСЯ ДЛЯ МНОГОЧИСЛЕННЫХ ИСПЫТАНИЙ (4 КВАДРАТА, 4 КВАДРАТА НА СЛАЙД. ИСПОЛЬЗУЙТЕ КАЖДЫЙ СЛАЙД, ПЕРЕД ОТКРЫТИЕМ НОВОГО ПАКЕТА СЛАЙДОВ).

Интерпретация:

  • (+) = Изменение цвета на красный в течение 30 секунд.
  • (-) = Нет изменения цвета на красный

Гидролиз крахмала

Цель: Для определения выработки амилазы.

СМИ: Пластинки крахмального агара (1% крахмала).

Реагенты / индикаторы: Грамм йода

Механизм / реакции: При контакте йода с крахмалом он становится сине-черным.

Направления: Нанесите на крахмальный агар полосу по прямой линии. После инкубации добавьте йод по Граму, по каплям, умеренно, чтобы покрыть рост и окружающую область на среде.

Интерпретация:

  • (+) = Бесцветная зона вокруг колоний, где крахмал гидролизован амилазами.
  • (-) = Нет зоны, среда сине-черного цвета, непосредственно прилегающая к росту.

Тест на уреазу

Цель: Для определения выработки уреазы.

СМИ: Отвар мочевины

Реагенты / индикаторы: Феноловый красный

Механизм / реакции: Уреаза гидролизует мочевину до аммиака и углекислого газа. Аммиак увеличивает pH культуры, в результате чего феноловый красный цвет меняется с желтого на ярко-розовый.

Направления: Засейте бульон мочевины и инкубируйте в течение 24-48 часов.

Интерпретация:

  • (+) = Красный или ярко-розовый цвет (pH> 8,4)
  • (-) = желтый цвет (pH <6)

Гидролиз казеина (обезжиренное молоко)

Цель: Для выявления производства casease.

СМИ: Агар из обезжиренного молока

Механизм / реакции: Казеаза протеолизирует казеин на пептиды и аминокислоты.

Направления: Разделите агар прямой линией и инкубируйте в течение 24-48 часов.

Интерпретация:

  • (+) = Чистая зона вокруг роста, указывающая на гидролиз казеина с помощью казеазы

  • (-) = Нет чистой зоны.

Разжижение желатина

Цель: Для определения выработки желатиназы.

СМИ: Nutrient Gelatin Deep (12-15% желатина).

Механизм / реакции: Желатиназа вызывает разложение и разжижение желатина → полипептиды → аминокислоты.

Направления: Глубокий укол, ⅔ длины по центру пробирки. После инкубации перед считыванием поставить в холодильник на 1 час.

Интерпретация:

  • (+) = Разжижение (после охлаждения)
  • (-) = Гели в холодильнике, без разжижения.

Этот тест не обнаруживает слабых положительных результатов, и используемая концентрация желатина может подавлять рост некоторых организмов.

Тройной сахарный железный агар (TSI)

(Обратите внимание, что будет использоваться либо TSI, либо KIA, а разница заключается в сахаре, доступном в тесте.)

Цель: Дифференциация Enterobacteriaceae по их способности сбраживать декстрозу (глюкозу), лактозу и сахарозу и производить газ и / или сероводород.

СМИ: TSI содержит сульфат железа, феноловый красный, декстрозу (глюкозу), лактозу и сахарозу.

Механизм / реакции:

Ферментация: Феноловый красный становится желтым в кислой среде.

Декстроза ферментирован; приклад среды становится желтым, а скос остается красным.

Лактоза или сахароза ферментирован; и приклад, и наклон становятся желтыми.

Газ: Газ от брожения может проявляться в виде разрывов или трещин в среде.

Сульфид водорода: Некоторые бактерии способны восстанавливать ( ce {SO4} ) = до ( ce {H2S} ) (сероводород). Железо соединяется с ( ce {H2S} ), образуя ( ce {FeS} ) (сульфид железа) соединение черного цвета. Это окрасит задницу в черный цвет. Таким образом, черный приклад указывает на производство ( ce {H2S} ).

Направления: Двойной посев иглой: нанесите штриховку на поверхность агара, затем нанесите удар, инкубируйте в течение 24-48 часов.

Интерпретация: Наклон / Стык, Газ, ( ce {H2S} )

  • ALK / A: (+) декстроза = щелочной наклон (красный) по кислотному стыку (желтый)

  • A / A: (+) декстроза, лактоза и / или сахароза = кислотный слой поверх кислотного стыка

  • ALK / ALK: без изменений, щелочной наклон над щелочным стыком

  • G: добыча газа

  • ( ce {H2S} ) (+): = Производство сероводорода = черный (производится в кислой среде)

Железный агар Клиглера (KIA)

Цель: Дифференциация Enterobacteriaceae по их способности ферментировать декстрозу (глюкозу), лактозу и производить газ и / или сероводород.

СМИ: KIA содержит сульфат железа, феноловый красный, декстрозу (глюкозу), лактозу.

Механизм / реакции:

Ферментация: Феноловый красный становится желтым в кислой среде.

Декстроза ферментирован; приклад среды становится желтым, а скос остается красным.

Лактоза ферментирован; и приклад, и наклон становятся желтыми.

Газ: Газ от брожения может проявляться в виде разрывов или трещин в среде.

Сульфид водорода: Некоторые бактерии способны восстанавливать ( ce {SO4} ) = до ( ce {H2S} ) (сероводород). Железо соединяется с ( ce {H2S} ), образуя ( ce {FeS} ) (сульфид железа) соединение черного цвета. Это окрасит задницу в черный цвет. Таким образом, черный приклад указывает на производство ( ce {H2S} ).

Направления: Двойной посев иглой: воткните в центр углубления, затем нанесите штрих на поверхность скошенного агара, инкубируйте в течение 24 - 48 часов.

Интерпретация: Наклон / Стык, Газ, ( ce {H2S} )

  • ALK / A: (+) декстроза = щелочной наклон (красный) по кислотному стыку (желтый)

  • A / A: (+) декстроза и лактоза = кислотный слой на кислотном стыке

  • ALK / ALK: без изменений, щелочной наклон над щелочным стыком

  • G: добыча газа

  • ( ce {H2S} ) (+): = Производство сероводорода = черный (производится в кислой среде)

Материалы

  • Организмы студенческого поголовья
  • 1 чашка крахмального агара / GP
  • 1 чашка агара с обезжиренным молоком / GP
  • 1 тюбик Желатин / все организмы
  • 1 чашка с триптофановым агаром / 2 GNR (засеять 2 GNR на каждую чашку)
  • 1 пробирка бульона мочевины / все, кроме GNR
  • 1 тюбик TSI или Kligler’s / GNR

Процедуры

  1. Засейте каждый GP на чашку с крахмальным агаром.
  2. Засейте каждый GP на чашку с обезжиренным агаром.
  3. Сделайте инокуляцию иглой каждого из ваших запасов в желатиновую пробирку.
  4. Засейте 2 ЗНР каждый на чашку с триптофановым агаром, засейте все ЗНР в целом.
  5. Засейте все свои запасы, кроме GNR, в пробирку с бульоном мочевины.
  6. Засейте каждый из GNR в TSI или Kligler (инокулируйте иглой, нанесите удар, затем косую полоску)

Полученные результаты

Дайте результаты для засеянных бактерий

Бактерия

Крахмал

Скисшее молоко

Желатин

Индол

Мочевина

TSI / Kligler’s

S / B G ( ce {H2S} )

Заключение

  • Изучите свои результаты и укажите, какой тест или набор тестов, если таковые имеются, лучше всего помогут определить (было бы неплохо сделать это для всех ваших исходных культур!) Следующее:
    • Кишечная палочка
    • Микобактерии смегматис
    • B. cereus
    • Lactococcus lactis