Информация

С какими отрицательно заряженными компонентами оболочек клеток связываются комплексы кристаллического фиолетового при окрашивании по Граму?

С какими отрицательно заряженными компонентами оболочек клеток связываются комплексы кристаллического фиолетового при окрашивании по Граму?



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

У грамположительных есть отрицательные компоненты в слое пептидогликана в виде фосфодиэфирных связей тейхоевой кислоты, а у грамотрицательных есть отрицательные компоненты в их внешней мембране в форме липополисахарида. Это то место, где связывается кристаллический фиолетовый?


Окрашивание по Граму основано на различиях в бактериальных мембранах. Грамположительные бактерии имеют толстый слой пептидогликана поверх клеточной мембраны, грамотрицательные бактерии имеют липидный слой снаружи, за которым следует тонкий слой пептидогликана, а затем и клеточная мембрана. См. Изображение для пояснения (отсюда):

Crytall violet диссоциирует на положительно заряженную молекулу красителя (CV+) и хлорид (Cl-). Резюме+ перемещается между слоями мембраны (внешней и внутренней мембраной) и задерживается там за счет добавления йода. Это используется для образования крупных кристаллических комплексов фиолетово-йода, которые сохраняются в процессе обесцвечивания.

В процессе обесцвечивания пептидогликановый слой грамположительных бактерий обезвоживается и, следовательно, сжимается, что предотвращает вымывание окрашивания. У грамотрицательных бактерий удаляется внешний липидный слой и обнажается слой пептидогликана (который намного тоньше), что позволяет удалить пятно. Тейхоевая кислота важна для жесткости мембраны, но не для самого связывания.

Использованная литература:

  1. Окрашивание по Граму
  2. Пятно по Граму спустя более века
  3. Использование окраски по Граму в микробиологии

Оболочки бактериальных клеток делятся на две основные категории: грамположительные и грамотрицательные, которые различаются окрашиванием по Граму. Любой тип может иметь капсулу из полисахаридов для дополнительной защиты. Как группа они известны как инкапсулированные в полисахариды бактерии.

Как и у других организмов, стенка бактериальной клетки обеспечивает структурную целостность клетки. У прокариот основной функцией клеточной стенки является защита клетки от внутреннего тургорного давления, вызванного гораздо более высокими концентрациями белков и других молекул внутри клетки по сравнению с ее внешней средой. Стенка бактериальной клетки отличается от стенок всех других организмов наличием пептидогликана (поли-N-ацетилглюкозамин и N-ацетилмурамовая кислота), которая расположена непосредственно за пределами цитоплазматической мембраны. Пептидогликан отвечает за жесткость клеточной стенки бактерий и за определение формы клеток. Он относительно пористый и не считается барьером проницаемости для небольших субстратов. В то время как все стенки бактериальных клеток (за некоторыми исключениями, например, внутриклеточные паразиты, такие как Микоплазма ) содержат пептидогликан, не все клеточные стенки имеют одинаковую общую структуру. Это особенно выражено в классификации на грамположительные и грамотрицательные бактерии.


STREPTOCOCCUS | Вступление

Пиогенные и другие стрептококки

Среда агар с сульфаметоксазол триметопримом (CCSXT) кристаллического фиолетового колистина (таблица 8) широко используется для обнаружения стрептококков группы А вместе с некоторыми другими подтверждающими анализами. Биохимические тесты, легко выполняемые в лаборатории, являются приемлемой альтернативой серологическим исследованиям для выявления гноеродных стрептококков (Таблица 9).

Таблица 8. Состав колистинового кристаллического фиолетового сульфаметоксазолтриметоприма (CCSXT) агара

Панкреатический гидролизат казеина, порошок14,5 г
Папайский гидролизат соевого шрота, порошок5 г
Натрия хлорид5 г
Кристально-фиолетовый0,2 мг
Колистина сульфат10 мг
Сульфаметоксазол24 мг
Триметоприм1,25 г
Агар15 г
Дистиллированная вода950 мл

Выдержите 15 минут, проверьте и при необходимости доведите pH до 7,3 ± 0,2, доведите до кипения, чтобы ингредиенты растворились, и стерилизуйте в течение 20 минут при 121 ° C. Быстро охладить примерно до 50 ° C, добавить 50 мл дефибринированной овечьей крови, перемешать, осторожно вращая, и разлить в чашки Петри.

Таблица 9. Дифференциация стрептококков с помощью биохимических тестов

Восприимчивость кPYRCAMP тестГидролиз гиппуратаЖелчный эскулинРост в 6,5% NaClВосприимчивость к оптохинам и желчи
БацитрацинSXT
S. pyogenes (группа А)++
S. agalactiae (группа B)а+++ а
Большая колония (группа C и G)а+
S. pneumoniae +
S. equi subsp. Equi d+

Символы: +, положительный -, отрицательный d, штамм-зависимый SXT, сульфаметоксазол и триметоприм PYR, тест на пирролидонилариламидазу CAMP, тест на усиление гемолиза с помощью Золотистый стафилококк бета-лизин.

a Исключения случаются время от времени.

Стрептококки группы D Lancefield будут расти на среде, содержащей желчь, и их можно отличить от других стрептококков быстрым гидролизом эскулина в присутствии 40% желчи. Их можно определить с помощью агаровой среды с канамицином и эскулином (КАА) (таблица 10).

Таблица 10. Состав агара с канамицином и эскулином (КАА)

Триптон20 г
Сухой дрожжевой экстракт5 г
Канамицина сульфат0,02 г
Натрия хлорид5 г
Цитрат натрия1 г
Эскулин1 г
Цитрат аммония железа0,5 г
Азид натрия0,15 г
Агар15 г
Дистиллированная вода1 л

Выдержите 15 минут, проверьте и при необходимости доведите pH до 7,0 ± 0,1 и доведите до кипения, чтобы ингредиенты полностью растворились. Стерилизовать в течение 15 минут при 121 ° C, охладить до примерно 47 ° C.


Окраска по Граму

Рисунок 5. Бактерии, окрашенные по Граму.

В 1884 году врач Ганс Кристиан Грам изучал этиологию (причину) респираторных заболеваний, таких как пневмония. Он разработал процедуру окрашивания, которая позволила ему идентифицировать бактерию в легочной ткани, взятой у умерших пациентов, как этиологический агент фатальной пневмонии. Хотя метод окрашивания по Граму мало помог в лечении болезни, он значительно упростил диагностику причины смерти человека при вскрытии. Сегодня мы используем методы окрашивания по Граму, чтобы помочь в идентификации бактерий, начиная с предварительной классификации на одну из двух групп: Грамм положительный или Грамотрицательный.

Дифференциальная природа окраски по Граму основана на способности некоторых бактериальных клеток сохранять первичное окрашивание (кристаллический фиолетовый), сопротивляясь процессу обесцвечивания. Окрашивание по Граму включает четыре этапа. Сначала клетки окрашивают кристаллическим фиолетовым с последующим добавлением фиксирующего агента для окрашивания (йода). Затем применяется спирт, который выборочно удаляет пятно только с грамотрицательных клеток. Наконец, добавляется вторичный краситель, сафранин, который окрашивает обесцвеченные клетки в розовый цвет.

Хотя в то время Грэм этого не знал, основное различие между этими двумя типами бактериальных клеток заключается в их клеточных стенках. Стенки грамотрицательных клеток имеют внешнюю мембрану (также называемую оболочкой), которая растворяется во время мытья спиртом. Это позволяет ускользнуть кристально-фиолетовому красителю. Только обесцвеченные клетки поглощают розовый краситель сафранин, что объясняет разницу в цвете между двумя типами клеток. По завершении процедуры окрашивания по Граму грамположительные клетки выглядят пурпурными, а грамотрицательные - розовыми.

При интерпретации мазка, окрашенного по Граму, вы также должны описать морфологию (форму) клеток и их расположение. На рисунке 5 представлены два различных типа бактерий, которые можно различить по реакции окрашивания по Граму, а также по их форме и расположению. Ниже опишите эти характеристики для обеих бактерий:

Грамположительные бактерии: Грамотрицательные бактерии:
Морфология
Договоренность

Процедура окрашивания по Граму

Подготовка мазка

Закрепите материал на предметном стекле с помощью метанола или нагрева. Если предметное стекло закреплено нагреванием, дайте ему остыть на ощупь, прежде чем наносить пятно.

Процедура / протокол окрашивания по Граму:

  1. Высушенный на воздухе, термофиксированный мазок ячеек в течение 1 минуты с кристально-фиолетовый окрашивающий реагент. Обратите внимание, что качество мазка (слишком высокая или слишком низкая концентрация клеток) повлияет на результаты окрашивания по Граму.
  2. Промойте предметное стекло в мягкой струе непрямой воды в течение 2 секунд.
  3. Водная горка с протравой: Йод по Граму. Подождите 1 минуту.
  4. Вымойте предметное стекло в мягкой струе непрямой воды в течение 2 секунд.
  5. Слайд наводнения с обесцвечивающее средство (обесцвечивающее средство на основе ацетон-спирта). Подождите 10-15 секунд или добавляйте по каплям к слайду, пока обесцвечивающий агент, стекающий со слайда, не станет прозрачным.
  6. Затопление с контрастным пятном, сафранин. Подождите от 30 секунд до 1 минуты.
  7. Промойте предметное стекло в непрямой струе водопроводной воды до тех пор, пока в сточных водах не исчезнет цвет, а затем промокните насухо промокательной бумагой.
  8. Наблюдайте за результатами процедуры окрашивания под масляной иммерсией (100x) с помощью микроскопа светлого поля.

Если вы изо всех сил пытаетесь вспомнить окрашивающие реагенты, использованные в этой процедуре, и их порядок, вы можете вспомнить это предложение «Cоме яп Аnd Stain », т.е. порядок Cкристаллический фиолетовый, яодин Аспирт / ацетон и последний Sафранин.


Разница в структуре грамположительных и грамотрицательных бактерий

На диаграмме ниже показаны различия в структуре грамположительных и грамотрицательных бактерий. Двумя ключевыми особенностями, которые приводят к разным визуальным свойствам грамположительных и грамотрицательных видов, являются толщина пептидогликанового слоя и наличие или отсутствие внешней липидной мембраны. Это связано с тем, что структура стенки влияет на способность клетки сохранять окраску кристаллическим фиолетовым, используемую в процедуре окрашивания по Граму, которую затем можно визуализировать под световым микроскопом.

Грамположительные бактерии имеют толстый пептидогликановый слой и не имеют внешней липидной мембраны, в то время как грамотрицательные бактерии имеют тонкий пептидогликановый слой и внешнюю липидную мембрану.

Поскольку грамположительные бактерии не имеют внешней липидной мембраны, при правильном указании на их структуру, а не на окрашивающие свойства, их называют монодермами. Внешняя липидная мембрана, которой обладают грамотрицательные бактерии, означает, что в отношении их физической структуры их называют дидермиями.

Техника окрашивания по Граму была разработана в 1884 году датским бактериологом Гансом Кристианом Грамом 1. Хотя окраска по Граму не скажет вам, какие именно виды вы смотрите, это может быть быстрый способ значительно сузить список потенциальных кандидатов и, при необходимости, провести последующее тестирование.


ГРАМ-ОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ БАКТЕРИИ

  1. Конверт клетки: самое первое различие между грамположительными и грамотрицательными бактериями заключается в толщине клеточной стенки. Клеточная оболочка грамположительных организмов состоит из более толстой клеточной стенки по сравнению с грамположительными бактериями.
  2. Липидная мембрана: Грамположительные бактерии не имеют внешней липидной мембраны, тогда как грамотрицательные бактерии имеют внешнюю липидную мембрану.
  3. Периплазматическое пространство: периплазма - это межмембранная структура, расположенная между клеточной мембраной и внешней мембраной (уникальная для грамотрицательных клеток). Это пространство присутствует у грамотрицательных бактерий, но иногда отсутствует у грамположительных бактерий.
  4. Пептидогликановый слой: У грамположительных бактерий пептидогликановый слой клеточной стенки толстый. Однако у грамотрицательных бактерий он тоньше.
  5. Устойчивость к осмотическому давлению: из-за более толстого пептидогликанового слоя стенки грамположительных клеток более устойчивы к осмотическому давлению, чем у грамотрицательных бактерий.
  6. Используемый краситель для окрашивания: краситель кристаллический фиолетовый (фиолетовый или синий) используется для идентификации грамположительных бактерий. С другой стороны, сафранин используется для идентификации грамотрицательных бактерий, что придает ему розовый или красный цвет.
  7. Устойчивость к антибиотикам: Грамотрицательные бактерии более устойчивы к антибиотикам, чем грамотрицательные бактерии. Эта способность устойчивости грамотрицательных бактерий делает их более опасными.

Грамотрицательная клеточная стенка:

Грамотрицательные бактерии имеют более тонкий слой пептидогликана (10% клеточной стенки) и теряют комплекс кристаллического фиолетового и йода во время обесцвечивания спиртовым ополаскивателем, но сохраняют контркрашивание сафранином, таким образом приобретая красноватый или розовый цвет. У них также есть дополнительная внешняя мембрана, содержащая липиды, которая отделена от клеточной стенки периплазматическим пространством.

Медицинская значимость грамотрицательной клеточной стенки:

Клеточная стенка грамотрицательных бактерий часто является фактором вирулентности, который позволяет патогенным бактериям вызывать заболевание. Вирулентность грамотрицательных бактерий часто связана с определенными компонентами клеточной стенки, в частности с липополисахаридом (также известным как ЛПС или эндотоксин). У людей ЛПС вызывает врожденный иммунный ответ, характеризующийся выработкой цитокинов и активацией иммунной системы. Воспаление возникает в результате выработки цитокинов, которые также могут вызывать токсическое воздействие на хозяина.


Базовый краситель - отрицательное пятно?

Есть много разных окрашивание техники. Метиленовый синий - это простое пятно который окрашивает ячейки в синий цвет. В отрицательное окрашивание техника, отрицательно заряженный пятно окрашивает фон, оставляя ячейки светлыми и неокрашенными. Яркие клетки хорошо видны на темном фоне.

Точно так же, почему применение нигрозина в качестве красителя считается отрицательным пятном? Его также можно использовать для пятно клетки, которые слишком хрупкие для термофиксации. Мы используем нигрозин как наш отрицательное пятно. Это означает, что пятно легко отдает ион водорода и становится отрицательно заряженным. Поскольку поверхность большинства бактериальных клеток заряжена отрицательно, поверхность клетки отталкивает пятно.

Также можно спросить, какой краситель используется при отрицательном окрашивании?

Как обычный краситель может окрасить бактерии?

Поскольку клетки обычно имеют отрицательно заряженные клеточные стенки, положительные хромофоры в основные красители иметь тенденцию к палка к клеточные стенки, делая их положительными пятна. С другой стороны, отрицательно заряженные хромофоры в кислой среде. красители отталкиваются отрицательно заряженными клеточными стенками, что делает их отрицательными пятна.


Лабораторный отчет о простом окрашивании микробов

Заявление об ограничении ответственности: Эта работа была отправлена ​​студентом. Это не пример работы, написанной профессиональными академическими писателями. Здесь вы можете заказать профессиональную работу. (Найдите цену, которая соответствует вашим требованиям)

* Скидка 10% на первый заказ, промо-код скидки "096K2"

1.0 Введение

Микробиология - это раздел биологии, изучающий микроорганизмы и их влияние на другие живые организмы. Микробы - это очень маленькие организмы, которые можно увидеть только с помощью микроскопа. К этой категории относятся несколько групп организмов: бактерии, цианобактерии, грибы и простейшие. В этой группе есть несколько видов, представляющих интерес для человека из-за их способности вызывать заболевания или их использования в пищевой промышленности, а микроорганизмы можно разделить на одноклеточные и многоклеточные. Эти организмы чрезвычайно разнообразны по типу клеток, размеру, цвету и репродуктивной энергии. Микробы можно классифицировать по типу клеток. Все клетки можно разделить на прокариотические и эукариотические, и основное различие между этими двумя типами клеток заключается в наличии связанного с мембраной ядра.

Курсовая работа по лабораторному отчету об эксперименте конъюгации E. Coli

Конъюгация - это естественный процесс, который включает перенос ДНК из одной клетки в другую через физическую связь между клетками. В следующем эксперименте два штамма бактериальных клеток Escherichia coli (донор F & # 8217lac + strs и реципиент F-lac-strr) подвергали конъюгации с получением штамма трансконъюганта (F & # 8217lac + strr). Использовали чашки MAC и стрептомицин.

Эксперимент проводился с целью использования микроскопии в светлом поле, подготовки и наблюдения бактериальных слайдов, а также выполнения методов окрашивания и объяснения механизма действия бактерий. Чтобы наблюдать и исследовать микробы, нам необходимо использовать микроскоп и методы бактериального окрашивания. Микроскоп - бесценный инструмент, позволяющий рассматривать объекты или структуры, которые в противном случае остались бы незамеченными невооруженным глазом человека. Кроме того, микроскоп может увеличивать объекты до 1000 раз, открывая микроскопические детали. У него есть специальные методы и оптика, поэтому он может выявить структуру и биохимию живых клеток. Микроскоп состоит из комбинации нескольких оптических линз. В этом эксперименте мы используем световой микроскоп.

Свет проходит через изогнутые линзы таким образом, что можно видеть объект больше, чем его фактический размер. Световые микроскопы в этом эксперименте имеют окулярные линзы с 10-кратным увеличением. Кроме того, есть четыре разных объектива на выбор: 10X, 40X и 100X. Для метода бактериального окрашивания существует два основных метода. Один из них использует метод мокрого нанесения, но бактерии слишком малы и слишком прозрачны, чтобы их можно было хорошо описать с помощью световой микроскопии и влажного количества. Поэтому их окрашивают, чтобы сделать их более заметными за счет придания контраста.

Простая окраска с одним слоем клеток окрашена в другой цвет, а краситель метиленовый синий используется для дифференциации Bacillus sp. Отрицательное окрашивание особенно полезно для определения размера и расположения клеток, и его можно использовать для окрашивания клеток, которые слишком хрупкие для термической фиксации. При использовании этой техники используемый раствор не окрашивает клетки, и бактерии проявляются в виде прозрачных пятен на темном фоне.

Метод окрашивания по Граму используется в качестве инструмента для дифференциации грамположительных и грамотрицательных бактерий в качестве первого шага для определения идентичности конкретного бактериального образца. Грамположительные и грамотрицательные организмы отличаются друг от друга различиями в их клеточных стенках, включая то, как клетки поглощают и удерживают пятна. E. coli, Bacillus sp и неизвестные микробы подразделяются на те, которые сохраняют йодно-кристаллический фиолетовый цвет после процедуры органической промывки, и те, которые этого не делают. Окрашивание по Граму наиболее стабильно, когда оно проводится на бактериях менее 24 часов, в то время как более старые культуры могут не сохранять первичное окрашивание и давать неточные результаты. 2.0 Обзор литературы

Очерк осмоса в луковой клетке

ВВЕДЕНИЕ Живая растительная клетка сжимается или набухает в зависимости от концентрации растворенного вещества в клетке по отношению к концентрации растворенного вещества в жидкости, окружающей клетку (1). Отсюда следует, что вода будет перемещаться из области с высокой концентрацией воды в область с низкой концентрацией воды, поэтому, если ячейка помещена в гипертонический раствор, вода будет перемещаться из ячейки в раствор.

Прибор, который используется для наблюдения за объектами, которые слишком малы для невооруженного глаза, называется микроскопом. Он может увеличивать объекты до 1000 раз, открывая микроскопические детали. С помощью специальных методов и оптики можно выявить структуру и биохимию живых клеток. Существуют различные типы микроскопов, наиболее распространенным и первым изобретенным является оптический микроскоп, который использует свет для изображения образца. Хотя Закариас Янссен обнаружил, что объект выглядит значительно увеличенным после экспериментов с несколькими линзами в трубке в 1590 году и в 1609 году, Галилей разработал принципы линз, но Антон ван Левенгук - разработчик микроскопа, который первым обнаружил микроорганизмы с помощью микроскопа. Световой микроскоп использует видимый свет для обнаружения мелких объектов. Самая большая проблема, когда дело доходит до наблюдения за живыми существами, - это получение достаточного контраста, определение фокальной плоскости, получение хорошего разрешения и распознавание объектов, когда их видят.

Мельчайшие бактерии можно наблюдать и определять форму клеток всего лишь при 100-кратном увеличении, и они невидимы в микроскопе с ярким полем. Окулярная линза представляет собой цилиндр, содержащий две или более линз. Функция заключается в том, чтобы сфокусировать изображение для глаза. Окрашивание - это процесс окрашивания микробов для повышения контрастности микроскопического изображения. Пятна или красители - это органические соединения, которые используются для выделения микроорганизмов или биологических тканей для просмотра с помощью микроскопа.

Микробы представляют собой бесцветные и очень прозрачные структуры, потому что они имеют почти такой же показатель преломления, как вода. Таким образом, микробы нельзя увидеть невооруженным глазом, поэтому используются различные методы окрашивания для увеличения видимости и контраста, выделения определенных морфологических особенностей, обнаружения внеклеточных и внутриклеточных компонентов микробов и сохранения их для будущего использования. Основные требования для окрашивания: чистое обезжиренное предметное стекло, бактерии, подлежащие окрашиванию, посевные петли и горелка Бунзена для стерилизации посевных петель до и после приготовления мазка. Два способа фиксации слайдов - это термическая фиксация и химическая фиксация. Тепловую фиксацию можно выполнить, пропустив предметное стекло над пламенем, а химическую фиксацию можно выполнить с помощью этанола, метанола, пикриновой кислоты, перманганата калия или паров формальдегида.

Курсовая работа по окрашиванию по Дифференциальному Граму

. Окраска по Граму - наиболее широко используемая процедура окрашивания в бактериологии. Это называется дифференциальным окрашиванием, поскольку оно позволяет различать грамположительные и грамотрицательные бактерии. Бактерии. дистиллированная вода) Очистите обезжиренное стеклянное предметное стекло Нихромовая проволочная петля Капельница Фильтровальная бумага Составной микроскоп Масло кедрового дерева Прочее ПРОЦЕДУРА: На a.

Функция фиксации состоит в том, чтобы убивать бактерии, обеспечивая безопасное обращение и предотвращая автолиз, инактивируя автолитические ферменты. Кроме того, он увеличивает проницаемость клеток для окрашивания, делает клетки жесткими и разворачивает глобулярные белки, обнажая реактивные группы и повышая сродство к окрашиванию. Разные красители имеют разное сродство к разным организмам и используются для дифференциации разных типов организмов. Бактерии заряжены слегка отрицательно при pH 7,0, и основной краситель окрашивает бактерии, в то время как кислотный краситель окрашивает фон. Для простого окрашивания используется только один краситель. Простое окрашивание легче выполнить, но оно имеет ограничения. Это был простой метод, потому что использовался только один окрашивающий агент и использовались либо основные, либо кислотные красители. Красители обладают свойством окрашивать микроорганизмы и специфически связываться с различными клеточными структурами. Для простого окрашивания используются положительно заряженные базовые красители. Эти красители будут прикрепляться к отрицательно заряженным

цитоплазма микробного организма.

Отрицательное окрашивание особенно полезно для определения размера и расположения клеток. Кроме того, его можно использовать для окрашивания клеток, которые слишком хрупкие для термической фиксации. Используются кислотные красители, такие как краситель нигрозин (10% раствор) и индийский краситель, который имеет отрицательный заряд. Эти красители отталкиваются отрицательно заряженной цитоплазмой микробов. Поэтому используемый раствор не окрашивает клетки и не дает контрастного фона. Обычно он используется для определения бактерий с помощью капсул.

Методы окрашивания по Граму идентифицируют бактерии как грамположительные, когда пятно остается, или грамотрицательные, что означает, что пятно смыто. В 1884 году Ганс Христиан Грам обнаружил, что кристаллический фиолетовый необратимо окрашивает одни бактерии, но его можно смыть с других. Окрашивание по Граму можно описать как метод окрашивания, используемый для классификации бактерий, то есть бактерий, окрашенных кристаллическим фиолетовым, с последующей кратковременной обработкой йодом по Граму и после обесцвечивания спиртом и обработки сафранином, а затем промывания водой.

Очерк о бактериях 2 Бактериальные клетки

Опишите строение и жизненные процессы бактерий. Бактериальные клетки, как и клетки растений, окружены клеточной стенкой. Однако стенки бактериальных клеток состоят из полисахаридных цепей, связанных с аминокислотами, а стенки клеток растений состоят из целлюлозы, которая не содержит аминокислот. Многие бактерии выделяют слизистую капсулу снаружи клеточной стенки. Капсула обеспечивает доп.

Те, которые сохраняют кристаллический фиолетовый, являются грамположительными, а те, которые не сохраняют его, являются грамотрицательными. Йод действует как протрава, помогая кристаллическому фиолетовому более прочно связываться. У грамположительных бактерий есть несколько слоев пептидогликана, которые сохраняют кристаллический фиолетовый цвет, в то время как он быстро вымывается от грамотрицательных бактерий, потому что их пептидогликан имеет однослойную толщину. Бактерии окрашиваются сафранином, который не проявляется на уже пурпурных грамположительных бактериях, но окрашивает обесцвеченные грамотрицательные бактерии в красный цвет.

Рисунок 3: Разница в клеточной стенке

1) Микроскоп включается, а затем регулируется источник света. 2) Линза объектива опускалась до минимума, не касаясь предметного стекла. 3) С помощью фиксирующего зажима предметное стекло закрепляли на предметном столике микроскопа. 4) Глядя в окуляр, отрегулировали осветитель и диафрагму. 5) Грубую регулировку медленно настраивали до тех пор, пока изображение желания не сфокусировалось. 6) Слайд был перемещен в центр поля, чтобы сфокусироваться на желаемом изображении. 7) Слайд наблюдается через объектив с низким увеличением (x10), объектив с высоким сухим (x40) и иммерсионный масляный объектив (x100) для более четкого обзора культуры. 8) По окончании использования микроскопа столик опускается в минимальное положение. Выключатель выключается, и микроскоп закрывается. Б) Методы бактериального окрашивания

I) Простое окрашивание

1) Пропитанные спиртом слайды запускают по пламени горелки Бунзена. На чистое предметное стекло с помощью стерильной петли капали одну каплю воды. 2) Культуры Bacillus sp. распределяются по поверхности водной горки снова с помощью стерильной петли. Петли снова были стерильными, чтобы убить лишний микроб. 3) Предметное стекло, содержащее культуру, быстро пропускали через пламя горелки Бунзена в течение двух секунд каждые два или три раза. 4) На предметное стекло красили метиленовым синим на минуту. 5) Предметное стекло ополаскивают водой и промокают до высыхания, используя бибулярную бумагу. 6) Подготовленное слайд исследовали под микроскопом с помощью линзы объектива с малым увеличением (x10), объектива с высокой светосилой (x40) и объектива с масляной иммерсией (x100), чтобы получить лучший обзор микроорганизмов. 7) Составлена ​​морфология микроорганизмов.

Эссе о применении методов окрашивания для просмотра и идентификации бактерий

. помещали на предметное стекло так, чтобы использовалась масляная линза объектива светового микроскопа. Бактерия просматривалась и. чтобы уничтожить бактерии. По окраске по Граму можно было определить, какие бактерии были грамположительными или грамотрицательными. Это . чтобы уничтожить бактерии. По окраске по Граму можно было определить, какие бактерии были грамположительными или грамотрицательными. Это .

8) Процедуры были повторены с бактериями E. coli.

1) Пропитанные спиртом предметные стекла запускали на пламени горелки Бунзена. Бактерии Bacillus sp. культуры распределяются по поверхности предметного стекла с помощью стерильной петли. Слайд сушили на воздухе без нагревания. 2) Два-три раствора азотного красителя были нанесены на мазок. 3) Растворы азотных красителей распределяли, используя край другой стороны предметного стекла, чтобы образовалась одна тонкая пленка. 4) Подготовленное предметное стекло сушили на воздухе.

5) Подготовленное предметное стекло исследовали под микроскопом с помощью линзы объектива с малым увеличением (x10), объектива с высокой светосилой (x40) и объектива с масляной иммерсией (x100) для лучшего обзора микроорганизмов. 6) Составлена ​​морфология микроорганизмов.

7) Процедуры были повторены с бактериями E. coli.

1) Пропитанные спиртом предметные стекла запускали на пламени горелки Бунзена. Бактерии Bacillus sp. культуры распределяли по поверхности предметного стекла с помощью стерильной петли. Слайд сушили на воздухе и подвергали нагреванию в течение нескольких секунд. 2) К предметному стеклу добавляли раствор кристаллического фиолетового и оставляли на одну минуту. 3) Предметное стекло промывали водой и заливали раствором йода в течение одной минуты. 4) Предметное стекло промывали водой и добавляли средство для обесцвечивания до исчезновения кристаллического фиолетового цвета. Горка ополаскивается водой. 5) Сафранин добавлен и ждет минуту. Затем подготовленное предметное стекло промывали водой не более 5 секунд. 6) Подготовленное предметное стекло сушили бибулярной бумагой и давали высохнуть на воздухе. 7) Подготовленное предметное стекло исследовали под микроскопом с помощью линзы объектива с низким увеличением (x10), объектива с высокой светосилой (x40) и объектива с масляной иммерсией (x100), чтобы получить лучший обзор микроорганизмов. 8) Составлена ​​морфология микроорганизмов.

Курсовая работа по кислотоустойчивому окрашиванию

. сопротивляться окрашиванию обычными методами, такими как окраска по Граму. [1] Его также можно использовать для окрашивания некоторых других бактерий, например. методы, потому что слайды, полученные с помощью этих методов, можно визуализировать с помощью стандартного светлопольного микроскопа. Флуорохромный метод. Изучите предметное стекло с помощью флуоресцентного микроскопа, оснащенного возбуждающим фильтром BG-12 и барьерным фильтром OG-1. Кислотоустойчивые бактерии имеют вид.

9) Процедуры были повторены с бактериями E. coli. и образец E2.

Условия эксперимента сохраняются как можно более стерильными, проводя эксперимент в пределах 10 сантиметров от пламени от горелки Бунзена. Это необходимо для предотвращения загрязнения образца микробами в воздухе. С той же целью носят перчатки. Петли, используемые для нанесения микробов на предметное стекло, трижды стерилизуют в пламени. Между тем предметное стекло с образцом должно было зафиксировать бактерии на предметном стекле. Что касается пятен, краситель метиленовый синий используется, чтобы сделать клетки и ядра более заметными6. Кристаллический фиолетовый используется для окрашивания клеточных стенок бактерий6, которые состоят из пептидогликана.

Нигрозин темного цвета, поэтому он используется при отрицательном окрашивании, чтобы обеспечить темный фон, на котором можно увидеть белые микробы. При окрашивании по Граму клетки окрашивают кристаллическим фиолетовым красителем. Затем добавляют раствор грамма йода (йод и йодид калия) для образования комплекса между кристаллическим фиолетовым и йодом. Этот комплекс представляет собой более крупную молекулу, чем исходный кристаллический фиолетовый краситель и йод, и нерастворим в воде. Спирт добавляется к образцу в качестве средства для обесцвечивания, которое обезвоживает слой пептидогликана, сжимая и стягивая его. Крупный кристаллический комплекс фиолетово-йода не может проникнуть через этот плотный пептидогликановый слой и, таким образом, задерживается в клетке грамположительными бактериями.

Напротив, внешняя мембрана грамотрицательных бактерий разрушается, и более тонкий пептидогликановый слой грамотрицательных клеток неспособен удерживать комплекс кристаллического фиолетового йода, и цвет теряется. К образцу добавляется контрастное краситель - сафранин, окрашивающий его в красный цвет. Поскольку сафранин светлее кристаллического фиолетового, он не нарушает пурпурную окраску грамположительных клеток. Однако обесцвеченные грамотрицательные клетки окрашиваются в красный цвет. Грамположительные бактерии (с более толстым пептидогликановым слоем) сохраняют окраску кристаллическим фиолетовым во время процесса обесцвечивания, в то время как грамотрицательные бактерии теряют окраску кристаллическим фиолетовым и вместо этого окрашиваются сафранином в процессе окончательного окрашивания.6 Из наших наблюдений при простом окрашивании Bacillus sp видно, что бактерии имеют палочковидную форму.

Бактерии окрашены в темно-синий цвет, внутренних структур не видно. Для отрицательного окрашивания при отрицательном окрашивании используется краситель нигрозин, который является кислотным красителем. Отказавшись от протона (в виде кислоты), хромофор красителя становится отрицательно заряженным. Поскольку клеточная стенка также имеет отрицательный заряд, окрашивается только фон вокруг клеток, оставляя клетки неокрашенными. Следовательно, клетки видны как белые пятна на темном фоне. E.coli также имеет форму палочки. После окрашивания по Граму на кишечную палочку, кишечная палочка становится розовой, что указывает на то, что это грамотрицательные бактерии, в то время как Bacillus sp отображается фиолетовым цветом, что означает, что это грамположительные бактерии. Неизвестные микробы из чашки Петри

Оказывается, это смесь грамотрицательных и грамположительных бактерий из-за наличия светло-розовых и пурпурных областей. Они имеют круглую форму.

5.0 Вопросы

1) Морфология включает размер, клеточную структуру, наличие эндоспор и жгутиков. From the report, in Figure 8, the unknown microbes from petri dish 1 give purple and pink colouration after gram staining, they’re round in shape. A more reliable method to identify cell morphology would be to use special stains to identify specific parts of a microbe like endospores, which is usually present in gram positive bacteria. The method use to stain endospores is called the Schaeffer-Fulton1 method, where Malachite Green is used to stain the endospores while Safranin is a counterstain. The end result would be pink bacteria with green dots within them. 2) Three methods to characterise a microorganism include:

I) Starch hydrolysis test

This bio-chemical test is used on gram-positive bacteria to identify bacteria that can hydrolyze starch (amylose and amylopectin) using the enzymes a-amylase and oligo-1,6-glucosidase. Often used to differentiate species from the general Clostridium and Bacillus. Because of the large size of amylose and amylopectin molecules, these organisms cannot pass through the bacterial cell wall. In order to use these starches as a carbon source, bacteria must secrete a-amylase and oligo-1,6-glucosidase into the extracellular space.

These enzymes break the starch molecules into smaller glucose subunits which can then enter directly into the glycolytic pathway. In order to interpret the results of the starch hydrolysis test, iodine must be added to the agar. The iodine reacts with the starch to form a dark brown colour. Thus, hydrolysis of the starch will create a clear zone around the bacterial growth. Например. Bacillus subtilis is positive for starch hydrolysis.2 ii) Protein analysis (gel electrophoresis, SDS-PAGE, establishment of clonality) The size and other differences between proteins among different organisms can be determined by using protein separation methods, collectively known as gel electrophoresis.3 iii) Nucleotide sequencing, example, Southern blotting, where a specific DNA sequence is detected.4 3)

Full standard procedure for operating a microscope5:

я. When moving a microscope, always carry it with both hands. Grasp the arm with one hand and place the other hand under the base for support. II. Turn the revolving nosepiece so that the lowest power objective lens is “clicked” into position. iii. The microscope slide should be prepared with a coverslip or cover glass over the specimen. This will help protect the objective lenses if they touch the slide.

Place the microscope slide on the stage and fasten it with the stage clips. iv. Look at the objective lens and the stage from the side and turn the coarse focus knob so that the objective lens moves downward (or the stage, if it moves, goes upward).

Move it as far as it will go without touching the slide. v. Look through the eyepiece and adjust the illuminator (or mirror) and diaphragm for the greatest amount of light. vi. Slowly turn the coarse adjustment so that the objective lens goes up (away from the slide).

Continue until the image comes into focus. Use the fine adjustment, if available, for fine focusing. If the microscope has a moving stage, then turn the coarse knob so the stage moves downward or away from the objective lens. vii. Move the microscope slide around so that the image is in the center of the field of view and readjust the mirror, illuminator or diaphragm for the clearest image. viii. Then change to the next objective lens with only minimal use of the focusing adjustment. Use the fine adjustment, if available. If you cannot focus on your specimen, repeat steps 4 through 7 with the higher power objective lens in place. ix.

The proper way to use a monocular microscope is to look through the eyepiece with one eye and keep the other eye open (this helps avoid eye strain).

Икс. Do not touch the glass part of the lenses with your fingers. Use only special lens paper to clean the lenses. xi. When finished, lower the stage, click the low power lens into position and remove the slide. xii. Always keep your microscope covered when not in use. Dust is bad for the microscope. 4) Three accidents that can occur during the experiment are: i. A sleeve catching fire while passing the slide through the flame in wide sweeping motions ii. the slide dropping due to a weak grip on it

The slide breaking due to over-exposure to fire and a strong grip.

The staining techniques in this experiment are the correct way to identify the shape and size of the bacteria. Bacillus sp is rod-shaped and gram positive while E.coli is rod-shaped and gram negative. The unknown microbes from petri dish 1 are a mixture of gram-positive and gram-negative bacteria and are round.

7.0 Recommendations

It is suggested that a smaller amount of microbes are smeared on the glass slide to prevent the sample from looking so dense under the microscope, thus preventing us from seeing the shape and size clearly. Next, increase the amount of the negative stain to ensure more visibility of the cells under the microscope. Lastly, clean the lens of the microscope before use to avoid confusing images in the eyepiece.

Использованная литература

1) Endospores, retrieved from: http://pscantie.myweb.uga.edu/stain.html 2) Rachel Watson M.S., retrieved from: http://www.uwyo.edu/molb2210_lab/info/biochemical_tests.htm#starch 3) Stephen T. Abedon, 6th July 1999, retrieved from: http://www.mansfield.ohio-state.edu/

sabedon/biol3010.htm 4) McGraw-Hill, retrieved from: http://highered.mcgraw-hill.com/olcweb/cgi/pluginpop.cgi?it=swf::535::535::/sites/dl/free/0072437316/120078/bio_g.swf::Southern%20Blot 5) How to Use a Microscope, retrieved from: http://www.microscope-microscope.org/basic/how-to-use-a-microscope.htm 6) Monica Z. Bruckner,Microbial Life Edcucational resources , retrieved from : http://pscantie.myweb.uga.edu/stain.html 7) Bio-imaging, 2004, retrieved from: http://web.path.ox.ac.uk/

bioimaging/bitm/instructions_and_information/EM/neg_stain.pdf 8) Staining, retrieved from: en.wikipedia.org/wiki/staining

9) Definition of staining, retrieved from: www.thefreedictionary.com/staining 10) Monica Z. Bruckner, Gram Staining, retrieved from: serc.caleton.edu/microbiolife/research_methods/microscopy/gramstain.html 11)

Similar Papers

The Microscope Experiment 1 Cells

. X 15. On a typical monocular microscope objectives magnification found is as followed: . cardiac muscle cell, may be indistinct unless special staining techniques are . slides come in many come colours and shape it depends on what specimen and which stain .

Bacteria Morphology

. slides and interpreting the findings of bacteria through direct and indirect staining technique. Hypothesis – The experiment will allow for further insight into stained . first portion consisted of a virtual microscope, it allowed for a different .

Gram Positive And Gram Negative Bacteria

. Unlike gram negative, gram positive bacteria have a violet color in gram staining. Due to high lipid and low peptidoglycan content of the cell wall of gram negative bacteria, the .

Impact Of Light And Electron Microscope On Cell Theory

. resolution but is restricted to dead cells. Without microscopes to view cells, the cell theory would not exist and many . made of cells, cells are the smallest units of life and that all cells come from pre-existing cells. Staining techniques later .

Cell Organelles Worksheet key

. structure that gives the cell its shape in plants, fungi, most bacteria and some protists Cell Wall 12. Produces a . 8. Digests excess or worn-out cell parts, food particles and invading viruses or bacteria Lysosome/Peroxisome 9. Small bumps located .


Commercial uses of non-pathogenic Gram-positive bacteria

Many streptococcal species are nonpathogenic, and form part of the commensal human microbiome of the mouth, skin, intestine, and upper respiratory tract. They are also a necessary ingredient in producing Emmentaler (Swiss) cheese.

Non-pathogenic species of corynebacterium are used in industrial production of amino acids, nucleotides, bioconversion of steroids, degradation of hydrocarbons, cheese ageing, production of enzymes etc.

Many Bacillus species are able to secrete large quantities of enzymes.

  • Bacillus amyloliquefaciens is the source of a natural antibiotic protein barnase (a ribonuclease), alpha amylase used in starch hydrolysis, the protease subtilisin used with detergents, and the BamH1 restriction enzyme used in DNA research.
  • C. thermocellum can utilize lignocellulose waste and generate ethanol, thus making it a possible candidate for use in production of ethanol fuel. It is anaerobic and is thermophilic, which reduces cooling cost.
  • C. acetobutylicum, also known as the Weizmann organism, was first used by Chaim Weizmann to produce acetone and biobutanol from starch in 1916 for the production of gunpowder and TNT.
  • C. botulinum produces a potentially lethal neurotoxin that is used in a diluted form in the drug Botox. It is also used to treat spasmodic torticollis and provides relief for approximately 12 to 16 weeks.

The anaerobic bacterium C. ljungdahlii can produce ethanol from single-carbon sources including synthesis gas, a mixture of carbon monoxide and hydrogen that can be generated from the partial combustion of either fossil fuels or biomass.


Смотреть видео: Микробиологическая диагностика: микроскопия, культуральный метод, методы выделения чистых культур (August 2022).